PCR机和实时PCR机之间有什么区别？

聚合酶链反应（PCR）通过允许从非常少量的模板材料中扩增DNA，从而彻底改变了分子生物学。对于包括诊断，取证和遗传研究在内的广泛应用，此技术至关重要。但是，PCR计算机和实时PCR计算机（也称为定量PCR或QPCR计算机）具有一些关键差异，尤其是在它们处理和测量DNA的扩增方面。本文将探讨这些差异以及现代研究和诊断中的实时PCR机器如何变得必不可少。

什么是PCR机器？

PCR机器 是 一种用于执行聚合酶链反应（PCR）的实验室仪器，该反应放大了特定的DNA序列。标准PCR技术涉及三个基本步骤：变性，退火和扩展，它们在多个周期中重复。 PCR的目的是创建大量特定的DNA段以进行进一步分析。

PCR机器的工作方式

典型的PCR机或热循环仪负责调节PCR过程中的温度。该机器会加热样品并冷却样品以允许DNA变性（分离双链），底漆退火（引物与单链DNA的结合）和DNA合成（通过DNA聚合酶的新DNA链伸长）。根据要扩增的DNA量调节扩增周期的数量。

传统PCR的主要优点是它的简单性。放大后，通常通过诸如琼脂糖凝胶电泳等技术分析PCR产物，在该技术中，放大的DNA可视化为频带。该方法提供了定性的结果 - 基本上告诉您目标DNA是否存在，但不存在该目标DNA。

什么是实时PCR机器？

实时PCR机器 或定量PCR（QPCR）机器是标准PCR机器的高级版本。实时PCR的主要区别在于它在发生DNA的扩增的能力，提供了有关样品中存在的DNA量的定量数据。 实时荧光定量PCR用于确定靶DNA序列的数量，对于诸如基因表达分析，病原体检测和核酸定量测量等应用特别有用。

实时PCR机器的工作方式

实时荧光定量PCR机器 与标准PCR机的运行相似，但添加了荧光检测系统。在每个扩增循环中，系统检测到通过DNA结合染料或旨在与扩增的DNA结合的特定探针发出的荧光。这种荧光与放大的DNA量成比例增加，这使机器可以实时跟踪扩增过程。然后，使用这些测量值的数据来计算每个周期中存在的目标DNA的量，从而提供实时定量结果。

PCR和实时PCR机之间的关键差异

尽管PCR和实时PCR机都用于扩增DNA，但两者之间存在几个关键差异：

1。监测DNA扩增

标准PCR机和实时PCR机之间的主要区别在于如何监测DNA的扩增：

●PCR机器：传统的PCR计算机不监视放大过程。该反应通过一组循环进行，并在过程完成后分析放大的DNA，通常是通过凝胶电泳或其他PCR技术。

●实时PCR计算机：实时荧光定量PCR机器在发生时监视DNA扩增，使用荧光检测来测量每个循环中DNA的增加。这使研究人员可以实时跟踪扩增过程并量化目标DNA的量。

2。DNA的定量

另一个重要的区别是量化DNA的能力：

●PCR机器：PCR机提供定性结果，告诉您样品中是否存在目标DNA序列或不存在。传统PCR无法进行定量，因为它不能测量在此过程中增加了多少DNA。

●实时PCR机器：实时荧光定量PCR机器可以进行定量测量。通过分析每个扩增周期中发出的荧光，实时PCR提供了样品中存在的DNA的精确定量。这使得它非常适合诸如基因表达分析，病原体负荷定量和测量DNA拷贝数变化之类的应用。

3。使用荧光染料或探针

使用荧光染料或探针监测扩增的能力是实时PCR的独有的：

●PCR机器：在传统的PCR中，通过凝胶电泳等方法对DNA扩增进行监测。检测过程中没有荧光染料或探针。

●实时PCR机器：实时荧光定量PCR机器使用荧光染料或与扩增的DNA结合的探针。随着DNA的扩增，荧光会按比例增加，并通过机器收集和分析该数据以确定存在的DNA数量。

4。应用和灵敏度

您选择的PCR计算机的类型还取决于应用程序和所需的灵敏度：

●PCR机器：PCR机主要用于定性结果足够的应用，例如克隆，DNA测序和某些类型的病原体检测。通常，当研究人员需要确认特定的DNA序列的存在或不存在时，它们通常被使用。

●实时PCR计算机：实时荧光定量PCR当需要定性和定量结果时，都使用机器。它们是基因表达研究的理想选择，检测低水平的病原体以及监测PCR反应的进展。量化DNA的能力使实时PCR对于高精度应用所必需的实时PCR，例如基因表达分析，病毒载荷测量和基因拷贝数分析。

5。数据分析和结果

PCR和实时PCR分析结果的方法也有所不同：

●PCR机：通常使用凝胶电泳等方法在放大过程后分析PCR的结果。此方法不是定量的，因为它只是检测到频带（指示目标DNA）是否存在。

●实时PCR计算机：实时荧光定量PCR机器提供直接的定量数据。随着扩增的进展，机器根据每个循环中发出的荧光计算样品中存在的DNA量。结果通常表示为荧光曲线，然后将其用于计算初始DNA浓度。

PCR和实时PCR机器的应用

PCR和实时PCR机器都具有广泛的应用，但它们在略有不同的情况下使用：

●PCR机器：用于不需要定量的DNA克隆，测序和初始病原体检测等应用。它也用于检测特定DNA序列的存在。

●实时PCR机器：用于基因表达研究，实时病原体监测，DNA和RNA的定量，病毒载荷测量以及其他定量应用。 实时荧光定量PCR对于诸如定量PCR（QPCR），逆转录PCR（RT-PCR）和数字PCR（DPCR）等应用也是必不可少的。

结论

总而言之，虽然PCR和实时PCR机都用于放大DNA，但关键差异在于它们量化样品中DNA量的能力。 PCR机器提供定性结果，而实时PCR机器提供实时的定量数据，可用于分子生物学，诊断和临床研究中的广泛应用。实时PCR的出现彻底改变了科学家和研究人员分析基因表达，病原体检测和DNA量化的方式，使其成为现代研究中的宝贵工具。

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