极低的样品浓度。对于边缘阳性，需要结合阴性/阳性质控材料进行深入分析。
目标菌株可能已发生突变，核酸提取效率低。
若使用第三方试剂，需要使用锐讯 dPCR系统进行优化和验证。一些参数包括引物和探针浓度、与锐讯液滴生成油的酶相容性以及热循环曲线。
1. 加入油相包裹试剂后停留时间过长(>10分钟) 2. 在样品添加过程中引入气泡 3. 移液的准确性 4. 预混液在油相包裹试剂之前添加
