基于液滴的PCR是一种用于DNA绝对定量的技术,尤其是在罕见突变检测的背景下。该方法涉及生成许多显微镜液滴,每个液滴包含单个DNA分子,反应试剂和荧光探针。这可以实现这些分离的液滴中各个DNA分子的平行扩增和分析。
基于液滴的PCR具有高灵敏度,精度和可伸缩性,使其成为对多种生物样品中罕见突变绝对量化的强大工具。事实证明,这项技术在促进我们对遗传变异及其在各个领域的影响的理解方面,尤其是在个性化医学和分子诊断的背景下都很有价值。
例子:
考虑一种方案,研究人员正在研究癌症患者的特定突变与耐药性相关的特定突变。突变很少见,仅发生在患者DNA的一小部分中。基于液滴的PCR用于量化样品中突变的DNA分子的确切数量。
在此示例中,液滴封装了单个DNA分子,PCR放大选择性地靶向包含耐药性突变的区域。荧光探针区分野生型和突变等位基因。通过分析液滴的荧光信号,研究人员可以精确确定存在的突变DNA分子的数量,从而提供了有价值的信息,以理解患者肿瘤中耐药突变的患病率。
在低频(例如在癌症的早期或监测最小残留疾病的监测)下,这种技术在关注突变的情况下特别有力。