- 在NIPT领域的数字PCR技术的真正快速实施中
在2024年10月中旬，《中国医学遗传学杂志》，第41卷，第10期，发表了一篇名为“关于数字PCR无创PCR无创筛查技术的专家共识，用于初步实施胎儿染色体障碍筛查 ” doi：10.3760/cma.j.cn511374-20240318-00176）。共识阐述了DPCR-NIPT的相关方面，包括：基本要求，应用程序范围，预测试服务过程，测试过程，报告解释，遗传咨询和技术的局限性。
专家共识中发布的数字PCR设备的图片是苏州锐讯生物科技有限公司 dropdx系列仪器的原始图片，详细信息可以在苏州锐讯生物科技有限公司网站（ https://wwww.rainsurebio.com ）的“设备和产品显示”部分中找到。
胎儿染色体非整倍性是产前筛查测试的主要组成部分，这有助于促进优生学和通过早期产前筛查和诊断提高分娩的质量。非整倍性产前测试是一种非侵入性，微创或侵入性的技术方法，在一定时间内检查孕妇，以评估胎儿染色体性非整倍性疾病的风险或进一步确认诊断。常规产前诊断方法具有侵入性，具有羊膜穿刺术，绒毛膜绒毛采样和脐静脉穿刺采样，以进行核分型分析，该分析具有潜在的胎儿流产或感染的风险。早期和三等常规产前筛查结合了超声检查与血清生物标志物分析，以及临床信息，例如孕妇年龄，胎龄，体重和糖尿病的存在，以使用评估软件来计算风险价值。但是，这些方法的敏感性和特异性受到限制。 1997年，Lo等。在孕妇的周围血液中发现了无细胞的胎儿DNA（CFF DNA），为胎儿染色体非整倍性奠定了非浸润性产前测试（NIPT）的基础。 2008年，Lo等。进一步证明了基于母体血浆和大规模基因组测序中CFF DNA的胎儿染色体非整倍性检测的可行性。
在此阶段，基于NGS的非侵入性产前测试（下一代测序）已用于胎儿三体术，第18次三体术和三体综合症的临床筛查中，并且在高风险妊娠中表现出很高的敏感性，特异性，特异性和检测率。但是，NGS-NIPT受胎儿，母亲，测序过程和数据分析的多种因素的影响，这可能会导致假阳性或假阴性结果。此外，NGS-NIPT测试的成本很昂贵，因此很难大规模快速有效地实施。
随着微流体技术的引入，代表PCR技术的数字PCR（DPCR）表现出更高的检测效率和敏感性。已经表明，DPCR具有在染色体非整倍性NIPT应用中更直接，快速和成本效益的潜力。此外，用于筛选的DPCR-NIPT和NGS-NIPT技术的组合可以进一步提高产前筛查测试的胎儿染色体肾小球的准确性，安全性和及时性。
此外，下面总结了与共识相关的建议：
建议摘要。
[建议1] DPCR-NIPT测试的成本与血清学筛查的成本相当，而其正检测率与NIPT的阳性检测率相似，这使其成为产前筛查的有希望的替代方法。这可能导致形成“用于初始筛查的DPCR-NIPT，用于次级筛查的NIPT和侵入性产前诊断的“ DPCR-NIPT）的诊断策略。 ”。
[建议2] 建议根据人员，组织，试剂和设备的要求执行DPCR-NIPT。
[建议3] 指的是血清学筛查和NIPT，DPCR-NIPT可用于同时筛选三体术，第18和三体术13。也可以使用DPCR-NIPT执行45，X和22Q11.2ds组合。
[建议4] 建议对接受DPCR-NIPT筛查的孕妇按适当，警告和不适当的人群进行分类，并确保获得知情同意。
[建议5] 不同的实验室可以根据自己的条件以及预测试和测试后的程序和质量控制来建立局部标准DPCR-NIPT程序和质量控制系统。
[建议6] 确定胎儿染色体疾病风险的标准应基于DPCR-NIPT结果。
[建议7] 应为测试建议的不同风险提供遗传咨询和治疗策略。
[建议8] 鉴于CFFDNA和DPCR-NIPT的特征，建议医疗机构建立“咨询〜后续”回顾性机制，并确保进行适当的后续工作。
关于DPCR-NIPT的技术挑战
仪器： 对设备的性能有严格的要求。由于用于NIPT的数字PCR设备需要区分正常和异常的CFF DNA拷贝数差异（通常小于4％），因此它们需要出色的精度和可重复性。鉴于正常和异常CFF DNA之间的拷贝数差异在5％以内，增加了液滴（即分区数）以扩增样品中CFDNA的总量，可以扩大正常和异常CFF DNA拷贝数的差异，从而增强检测敏感性。
在DAI [16]的研究中，计算了特定条件下所需的最小液滴数量。在5％（0.05）和30％（0.3）的CffDNA下，需要大约18,000滴液滴或PCR反应，以区分非整倍性妊娠与置信水平为95％（1.96倍）置信度的非整倍型怀孕。
试剂： 用于NIPT需要实现多个测试的方法，测试越准确。试剂的原理是通过检测多个靶标来扩增正常和异常胎儿样品之间的拷贝数差。例如，假设正常胎儿和异常胎儿之间的拷贝数差异为1％，一个目标的100份副本之间的差为1份。如果测试了10个目标，则将差异放在10份中，这将增加测试的灵敏度。
在Lašáková的研究[15]中，作者分别使用了16个引物对和两个荧光标记为21号染色体和第18染色体的锁核酸探针。该测试在对30个孕妇的血浆样本中进行了盲试验，该测试在21岁的孕妇风险21岁的孕妇风险中，具有1：4至1：4至1：4至1：4到1：4到1：4到1：4到1：4到1：4：4至1：401。测试结果和侵入性诊断程序是完全一致的（敏感性，特异性，预测值和负预测值均为100％）。在DAI [16]的一项研究中，使用10组引物探针进行染色体21、18和13的多重测试。在TAN [14]的一项研究[14]，10 ng的GDNA损坏的GDNA和不同数量的引物对（分别为Chr21和Chr18的1、5、5、10和20对），用于在CHR21和CHR1上进行验证，并在chr中使用了摩尔数，并且在摩尔群之间进行了摩尔的关系。 DDPCR。结果表明，检测到的靶DNA分子的量高度取决于底漆对的数量，并且考虑到一定量的DNA，增加引物对数可以增加检测到的靶DNA分子的数量。
选择更敏感的数字PCR设备以及精确设计和经过验证的多重数字PCR试剂是提高DPCR-NIPT分析的灵敏度和特异性的关键。
关于苏州锐讯生物科技有限公司 Ltd. Co.
苏州锐讯生物科技有限公司是一家专门用于精确诊断的创新公司。遵守“创新，智能制造，健康促进”的使命，Charure Scientific主要从事创新诊断平台和IVD诊断解决方案的开发。该公司根据公司在微流体和智能制造领域的连续技术进步，开发了世界领先的科学仪器和分子诊断产品，包括微流体研究平台，数字PCR系统和支持试剂盒。该公司的创始团队成员都毕业于常春藤联盟大学，并为许多国际认可的生命科学制造商工作，具有丰富的行业经验和尖端的观点。 苏州锐讯生物科技有限公司致力于通过创新技术和智能制造来增强客户的能力，以促进医疗保健行业的发展。
