标题：数字PCR对人类疟疾寄生虫的快速多重测定
doi：10.1016/j.cca.2022.12.001
杂志：Clinica Chimica Acta
单位：华山医院隶属于福丹大学
出版：2022年12月
研究平台：召唤科学DDX-2044 数字PCR系统
2022年12月，来自Huashan医院的Ming Guan和Haoqin Jiang团队隶属于Fudan University，在《临床Chimica acta ''clinica '中，数字pcr fy Digital Pcr fy Digital PCR fy Digital Pcr firal Mallaria Parasites的迅速多重分析。
这项研究建立了一种新型的多重数字PCR系统，该系统侧重于低浓度疟疾感染的快速分子检测。它适用于诊断混合疟疾感染和连续监测多个样品，以及作为绝对定量病原体的重要临床检测方法，以确保快速准确诊断涉嫌时施疟疾感染的患者。多路复用PCR的分析灵敏度低至0.557copies/μL，灵敏度为98.0％，特异性为100％，这特别适合于诊断低浓度的疟疾感染以及治疗过程中治疗作用的监测。
研究背景
疟疾，艾滋病和结核病在全球范围内被认为是危害人类生命和健康的三个主要公共问题之一。它们是由疟原虫引起的寄生疾病，由蚊子传播。根据世卫组织最新的世界疟疾报告，全球大约有2.41亿个疟疾病例，疟疾死亡627,000例。与上一年相比，大约有1400万例新病例和69,000例新死亡。
疟原虫是由蚊子传播的孢子，是疟疾的致病药物。寄生人体的四种主要疟原虫，包括疟原虫，疟原虫疟疾，恶性疟原虫和卵形疟原虫。这些疟疾寄生虫有两个宿主，蚊子和人类。它们在肝细胞中寄生，并在人类中依次寄生红细胞。在红细胞中，除了精神分裂症的增殖外，一些蛋白酶形成了配子植物，并开始了性繁殖的初步发展。
在2021年，在四年内，土著疟疾病例为零，中国被世界卫生组织（WHO）成功认可为无疟疾国家。目前，疟疾感染的病例主要从国外进口。
研究方法
从2016年至2021年，总共从华山医院选出了总共39名通过显微镜诊断的疟疾阳性患者；从这些患者那里收集70个血液样本。此外，本研究还包括20名健康人，20名热火患者和6例患有其他类型的血液感染寄生虫的患者。通过血液涂片和DPCR并联测试每个血液样本。通过优化单个系统四重荧光标记的探针检测系统，验证了DPCR的准确定量能力，并输出了临床疟疾血液样本的准确拷贝数。还使用快速诊断测试来验证DPCR获得的结果。
研究结果
DPCR系统可以快速诊断和定量疟疾DNA样品。多重DPCR的分析灵敏度低至0.557拷贝/μL（95％CI 0.521-0.607），其诊断临床标本的敏感性为98.0％，其特异性为100％。此外，通过DPCR系统检测到三个多个疟原虫共感染样品，包括一例三质子质疟原虫。通过连续测试研究的39例患者的每日血液样本，DPCR可以监测药物治疗的功效。结果表明，药物后恶性疟原虫DNA的浓度范围为0拷贝/μL-5474拷贝/μL，实现了对抗疟药治疗作用的实时监测。该研究还发现，与全血相比，使用缺乏血浆的血细胞样品更容易，更阳性地检测到疟原虫。
多重数字PCR系统可以清楚地检测到两种或三种疟疾混合感染全血样品，以有效诊断多种疟疾混合感染。这是对传统血液涂片显微镜检查方法的理想补充，可以及时弥补缺少血液涂片中非典型疟疾的检测和低浓度混合感染患者，从而帮助临床医生及时调整药物治疗方案。
连续监测患者长达20天，表明数字PCR可以准确地量化患者全血中的疟疾浓度，从视觉上显示患者的真实感染状态，并反映了患者的疟疾感染率的变化，从而实现了实时监测症患者的疗效，从而实现了更可靠的实验性证据的实时监测。
