最近，哥伦比亚大学Aaron Diamond AIDS研究中心的研究人员在《疫苗》杂志上发表了一篇论文，其影响因子为7.8，研究了一项基于Nanogeneratortm Flex系统的SARS-COV-2疫苗开发的研究结果，该研究证明了在LNP技术中用于开发Covid vactine covid vactine vevelly veffice vefficine veptraugh。 LNP技术在LNP技术的应用中取得了重大突破，可以成功地应用于Covid疫苗的开发。
在过去的几年中，新颖的冠状病毒为我们带来了全球传染病流行，对世界各地的医疗保健系统产生了巨大影响。虽然几种冠状病毒疫苗先前已被批准用于使用，并已证明有效地减少了感染的严重程度和传播。但是，由于病毒的迅速发展以及已用于LNP递送的媒介的毒性，也存在缺点，这导致了新一代的SARS-COV-2疫苗在议程上的发展，以应对这种威胁和潜在的未来大流行病。
与灭活的疫苗相比，亚基疫苗提供了更高的安全性，并且是多种核酸疫苗（如辉瑞和现代）的替代品。但是，这些疫苗通常不那么免疫原性，并且通常需要添加佐剂或依靠递送平台来增加抗原材料的生物半衰期，以提高改善的免疫调节性细胞因子反应。此外，初步临床试验研究表明，开发的大多数候选疫苗使用SARS-COV-2的结构S蛋白（SP）作为靶标，因为SP被认为是诱导中和抗体的最合适的抗原。但是，Covid-19候选疫苗的候选物不应限于SP。研究SARS-COV-2的整个蛋白质组可能揭示了其他非结构蛋白（NSP）或开放式阅读框（ORF）辅助蛋白，这对于病毒性毒力，病毒粘附，复制和宿主入侵也可能至关重要。 因此，必须设计出最佳最佳的下一代疫苗或疫苗平台，以诱导广泛中和抗体和细胞反应，以进行全面和耐用的保护。
人们对基于微流体合成系统的三甲基化壳聚糖（TMC）的纳米颗粒的逐层（LBL）递送多种抗原的平台的开发非常关注。该分层（LBL）合成平台允许SARS-COV-2 S蛋白/肽（SP）以及非结构性或附属蛋白/ T细胞表位肽的共递送，同时还提供在递送配合物中添加佐剂。壳聚糖脱乙酰化的产物壳聚糖是一种特定的阳离子多糖。它具有无毒性，生物相容性，生物降解性，粘附性和成本效益的优势。该基于LBL的三甲基化壳聚糖的输送平台可以增强抗原稳定性，延长作用持续时间，控制药物释放，优化不溶性肽的溶解度，并增加疏水性抗原（如肽）的细胞膜通透性。 但是，大多数报道的合成壳聚糖纳米颗粒的方法不适合大规模合成，而扩大生产以满足潜在疫苗推出的要求被认为是基于壳聚糖的纳米粒子平台的主要挑战。
基于纳米生成器TM Flex系统，Aaron Diamond AIDS研究中心的研究人员开发了一个平台，用于逐层（LBL）交付三甲基化壳聚糖（TMC）依赖性纳米颗粒，用于大规模生产LBL的lbl二甲基化壳聚糖（TMC）-Cov19，np faccine faccine faccine faccine faccine faccine faccine faccine faccine faccine faccine faccine faccine of faccine faccine of'从病毒变异或T细胞表位肽中递送不同的抗原。基于NP的疫苗候选者（LBL-COV19），旨在允许“插件”修饰来自病毒变体或T-Cell表位肽的不同抗原，以增强对未来大流行病暴发的准备。
在新的疫苗研究过程中，团队进行了三甲基化壳聚糖（TMC）纳米粒子和LBL-COV19的合成，并使用纳米生成器-TM flex微流体纳米粒子合成。自动化。液体流由每条线中的流传感器控制以进行自动化。然后，使用微型混合芯片（CHP-MIX-3）来实现不同前体溶液或液相的快速，有效和受控的混合。
三甲基化壳聚糖（TMC）纳米颗粒的合成
为了使用NananogenerTM-TM Flex微流体纳米颗粒合成系统更快地生产TMC纳米颗粒，该团队首先使用与传统方法相同浓度的配方，以允许在方法之间进行直接比较。将来自PG-MFC压力控制器的预设压力施加到每个样品管上。将每个前体溶液穿过试管进入微搅拌芯片的两个入口，并在微流体芯片的通道内混合。将TMC溶液以1至5 mg /ml的浓度添加到样品途径＃1中。将浓度为1 mg /mL的TPP溶液加入样品途径＃2。当TMC与TPP的比率为5：1时，消耗了1 mL的TMC溶液，消耗了0.2 mL的TPP溶液，并获得了大约1.2 mL的NP溶液，该体积的总反应时间为12 s。根据NP合成的前体饲料的开发比率（10：1-3：1）测试了TMC和TPP的不同比率，以确定最佳的合成条件。我们的方法获得了更好的可重复性（3个重复），NP的NP（180-210 nm）的较窄范围和NP的较小多分散指数（PDI）。冷藏24小时后，NP的平均大小（由DLS）和ZETA势值没有显着变化，这进一步证实了NP的成功产生及其在制冷下的稳定性（表2）。
表2。3空TMC NP大小和Zeta电位数据的重复使用微流体设备合成，并在24小时后老化。数据显示在表2中。
同时，使用纳米发育仪TM flex微流体合成系统的另一个优点是，可以在较短的时间内获得更大量的产物，而在不到10分钟的时间内，产量为10 ml。使用传统方法，我们只能在不到1小时的时间内获得1毫升的产品。此外，我们可以使用较大的屈服合成装置，即纳米生成器最大微流体合成系统，以获得1 L的产率。
LBL-COV19配方的合成
为了将TMC纳米颗粒中的抗原亚基蛋白或肽封装，该团队基于蛋白质或肽的等电点（PI）值将蛋白质/肽用TMC或TPP对其进行了混合，然后将溶液加载到反应器储量中。如果抗原的PI值高于pH 7（反应溶液的pH值），则必须用TMC对抗原进行预混合。否则，我们将其用TPP溶液将其对其进行了对，以允许肽/蛋白质和前体之间的附着。从常规方法到微流体合成，我们发现所获得的TMC抗原TPP NP的DLS大小变化。TMC以1.5 mg/ml的浓度溶解在超纯DI水中，TPP溶解在2 mg/ml的浓度下，将TPP溶解在超能源的水中。将峰值蛋白或肽（抗原）溶液以40 mg/ml的浓度为50μl的体积，将其添加到TMC溶液中；抗原浓度为0.3 mg/mL，TMC与抗原的比率为5：1。混合后，将TMC/抗原溶液放置在15 mL猎鹰管中，可以将其插入位2连接线中，以作为微流体系统中的前体溶液1。将TPP溶液作为前体溶液2放置在位置1连接线中。TMC的流速为5 ml/min，TPP的流速为1 ml/min，总流速为6 mL/min。每种反应消耗1 mL TMC溶液和0.2 mL TPP溶液。 TMC与TPP的比率为5：1，所获得的TMC -SPIKE -TPP溶液的总量约为1.2 mL，反应时间为0.2分钟（12 s）。 TMC：TPP：SPIKE或TMC：TPP：肽：单层或双层配方的尖峰组件的最终质量比分别为5：1：1：1：1：1：1：1：1：0.5：1，使用微流体生产系统（200-300 Nm）生成的NPS的NPS尺寸是由这些00（200-300 Nm）较小的合成（M）。此外，合成的TMC -antigen -TPP（LBL -COV19）纳米颗粒的标准偏差也从163 nm降低到32 nm，TMC纳米颗粒的标准偏差从63 nm到19 nM的纳米颗粒也降低至19 nM。这对于将来的GMP生产是可行的。在SEM结果（图2B）中，我们观察到LBL-COV19公式的纳米颗粒的直径为94.6±27.7 nm，并从60个纳米颗粒产生。
图2。TMC纳米颗粒（A）和LBL-COV-1公式纳米颗粒（B）的扫描电子显微镜图像。插入右下角的图像是TMC纳米颗粒和LBL-COV-1公式纳米颗粒的高放大图像。
通过本文的系统研究，该团队开发了一种基于纳米生成器-TM Flex微流体合成系统合成TMC纳米颗粒和LBL疫苗制剂的方法。通过在微流体设备的微通道中合成纳米颗粒制剂，以利用连续流以获得最终产物，可以克服传统方法中的常见瓶颈。使用另一个设备模型（纳米生成器最大），该方法还可以减少反应时间，同时更好地控制最终的NP组成，缩小粒度分布并提高合成的可重复性，从而可以更好地控制反应时间。
纳米生物TM Flex系统已发表了80篇文章，并引用了世界上许多著名研究所的近1000次。 Representative customers include Tsinghua University, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai University of Science and Technology, Shenzhen Advanced Research Institute of the University of Hong Kong, Soochow University, Harvard University, Yale University, Stanford University, University of California, Berkeley, Broad institute, MD Anderson Cancer center, MIT, NASA, Livermore National Laboratory, Nanyang Technological University, Gateway University, and many 其他的。国家实验室，南南技术大学，门德莱夫大学，意大利萨勒诺大学，等等。
原始：https： //doi.org/10.3390/vaccines12030339
