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文献介绍|Rainsure数字PCR技术及多型疟原虫分型和治疗定量监测
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文献介绍|Rainsure数字PCR技术及多型疟原虫分型和治疗定量监测

浏览数量: 0     作者: 本站编辑     发布时间: 2022-12-15      来源: 本站

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文献介绍|Rainsure数字PCR技术及多型疟原虫分型和治疗定量监测

标题:通过数字 PCR 快速多重检测人类疟原虫

DOI:10.1016/j.cca.2022.12.001

期刊:临床化学学报

单位:复旦大学附属华山医院

发布日期:2022 年 12 月

研究平台:Rainsure Scientific DropDx-2044 数字PCR系统


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2022年12月,复旦大学附属华山医院官明、姜浩勤团队在《Clinica Chimica Acta》杂志上发表文章《A Rapid Multiple Assay of human malaria parasites by digital PCR》。


本研究建立了一种新型多重数字PCR系统,专注于低浓度疟疾感染的快速分子检测。适用于疟疾混合感染的诊断和多样本连续监测,作为临床病原体绝对定量的重要检测方法,保证对疑似疟疾感染患者的快速、准确诊断。多重PCR分析灵敏度低至0.557copies/μL,灵敏度98.0%,特异性100%,特别适合低浓度疟疾感染的诊断和治疗过程中的疗效监测。


研究背景

疟疾、艾滋病、结核病被世界公认为危害人类生命健康的三大公共问题之一。它们是由疟原虫引起并通过按蚊传播的寄生虫病。根据世界卫生组织最新的《世界疟疾报告》,全球约有2.41亿疟疾病例,62.7万人死于疟疾。与上年相比,新增病例约1400万例,新增死亡病例约6.9万人。


疟原虫是由按蚊传播的孢子,是疟疾的病原体。寄生在人体的疟原虫主要有四种,包括间日疟原虫、三日疟原虫、恶性疟原虫和卵形疟原虫。这些疟疾寄生虫有两个宿主:按蚊和人类。它们先后寄生在人体的肝细胞和红细胞中。在红细胞中,除了裂殖体增殖外,一些裂殖子形成配子体并开始有性生殖的初始发育。


2021年,中国本土疟疾病例四年零,成功被世界卫生组织认定为无疟疾国家。目前,疟疾感染病例主要来自境外输入。


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研究方法

选取2016年至2021年华山医院镜检确诊的疟疾阳性患者39例;从这些患者身上采集了 70 份血液样本。此外,本研究还纳入了20名健康人、20名发热患者和6名患有其他类型血液感染寄生虫的患者。每个血样均通过血涂片和 dPCR 进行平行测试。通过优化单系统四重荧光标记探针检测系​​统,验证了dPCR的准确定量能力,输出了临床疟疾血样单位体积的准确拷贝数。还使用快速诊断测试来验证 dPCR 获得的结果。



研究成果

dPCR 系统能够快速诊断和定量疟疾 DNA 样本。多重dPCR的分析灵敏度低至0.557拷贝/μL(95% CI 0.521-0.607),对临床标本诊断的敏感性为98.0%,特异性为100%。此外,dPCR系统还检测到3例多重疟原虫双重感染样本,其中1例为三重疟原虫双重感染。通过连续检测该研究中 39 名患者的每日血液样本,dPCR 可以监测药物治疗的功效。结果表明,用药后恶性疟原虫DNA浓度范围为0拷贝/μL-5474拷贝/μL,实现了抗疟药物疗效的实时监测。研究还发现,与全血相比,使用去血浆的血细胞样本更容易、更准确地检测出疟原虫。


多重数字PCR系统可清晰检测两种或三种疟疾混合感染全血样本,有效诊断多种疟疾混合感染。这是对传统血涂片镜检方法的理想补充,可以及时弥补血涂片中非典型疟疾和低浓度混合感染患者的漏检,从而帮助临床医生及时调整用药方案。


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对一名患者长达20天的连续监测表明,数字PCR可以准确定量患者全血中的疟疾浓度,直观地显示患者的真实感染状况,及时反映患者体内疟疾感染率的变化,达到实时监测抗疟药物疗效的目的,是为消除患者疟疾提供更可靠的实验室证据。


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