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A 在系统配置过程中，引物、酶等成分过量，但模板并不过量。模板DNA分子随机进入各个小反应体系。PCR扩增后，含有模板的系统完成扩增，不含模板的系统不进行扩增。
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A 原因：菌株突变，电流探头不适合检测；因提取方法（未能完全提取样本中所含细菌、真菌等）导致的核酸无法检测；
排除验证：可以验证从培养物中提取 DNA，然后用我们的探针进行扩增；建议血培养和核酸检测使用同一血样。
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A 判定标准≥3个阳性液滴，但对于临界点的阳性液滴，需要结合阴性/阳性质控材料进行深入分析。当信号出现垂直线时，判断为非正信号。
低浓度样品，可选择较高倍数的缓冲液进行上样调整。
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A 血浆：建议≥2ml，成分比较简单，去除了人体DNA的污染。核酸组成较简单，细菌核酸浓度较高，便于检测。
注意：离心时转速不宜过高，否则容易导致胞内细菌流失，影响最终检测结果；
全血：建议≥4ml，成分比较齐全，与血培养标本一致性好，但存在人体DNA污染。
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A 细菌（革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌）、侵入性真菌、病毒。同时还可以进行耐药基因检测。
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A 建议设置一个分裂对照实验。不设置时，一般以荧光强度3000作为阈值点，或者以阴性簇作为判断阳性的参考。可以参考流式细胞术的经验来进行划分。
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A 荧光定量基于扩增曲线。每个周期的检测信号会按2的N次方对数计算，只能用于区分2倍以上的差异。数字PCR系统通过泊松分布计算公式可以检测低至0.1倍的基因表达差异。
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A 对于突变频率，数字PCR可达到0.01%以下，微生物可实现单拷贝；RT-PCR只能达到1%。
